La cromatografía líquida de alto resolución o comúnmente conocida como HPLC es una
técnica analítica utilizada para separar, identificar o cuantificar cada
componente en una mezcla.
La mezcla se separa mediante el principio
básico de cromatografía en columna y luego se identifica y cuantifica por
espectroscopia.
En la década de 1960, la cromatografía de
columna LC con sus columnas de vidrio adecuadas de baja presión. Más tarde, se
desarrolló aún más para la HPLC con sus columnas de metal adaptadas a alta
presión.
Por lo tanto, HPLC es básicamente una forma
altamente mejorada de cromatografía líquida.
En lugar de dejar que un solvente gotee a
través de una columna bajo la gravedad, es forzado a través de altas presiones
de hasta 400 atmósferas.
Principio de HPLC
La purificación se lleva a cabo en una
columna de separación entre una fase estacionaria y una móvil.
La fase estacionaria es un material granular
con partículas porosas muy pequeñas en una columna de separación.
La fase móvil, por otro lado, es un
disolvente o mezcla de disolventes que se fuerza a alta presión a través de la
columna de separación.
Los componentes individuales de la muestra
migran a través de la columna a diferentes velocidades debido a que se
mantienen en un grado variable por las interacciones con la fase estacionaria.
La muestra es detectada por un detector. El
detector envía una señal al software de HPLC.
Al final de esta operación, se obtiene un
cromatograma en el software de HPLC en la computadora.
El cromatograma permite la identificación y
cuantificación de las diferentes sustancias.
Tipos de HPLC
- · Fase normal
- · Fase inversa
- · Cromatografía de Intercambio iónico
- · Cromatografía de exclusión molecular
Ventajas de
la HPLC
· Velocidad
· Eficiencia
· Exactitud
· Versátil y extremadamente preciso a la hora de identificar y cuantificar
componentes químicos.
· Aplicaciones de HPLC
- Análisis de drogas
- Análisis de polímeros sintéticos.
- Análisis de contaminantes en la analítica ambiental.
- Determinación de fármacos en matrices biológicas.
- Aislamiento de productos valiosos.
- Pureza del producto y control de calidad de productos industriales y productos químicos finos.
- Separación y purificación de biopolímeros como enzimas o ácidos nucleicos.
- Purificación del agua
- Pre-concentración de componentes traza
- Cromatografía de intercambio de ligandos
- Cromatografía de intercambio iónico de proteínas.
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High performance liquid chromatography
or commonly known as HPLC is an analytical technique used to separate, identify
or quantify each component in a mixture.
The mixture is separated using the
basic principlea of Column chromatography and
then identified and quantified by spectroscopy.
In the 1960s the column chromatography
LC with its low-pressure suitable glass columns was further developed to the
HPLC with its high-pressure adapted metal columns.
HPLC is thus basically a highly
improved form of column liquid chromatography.
Instead of a solvent being allowed to
drip through a column under gravity, it is forced through under high pressures
of up to 400 atmospheres.
Principle of HPLC
The purification
carried out in a separation column between a stationary and a mobile phase.
The stationary
phase is a granular material with very small porous particles in a separation
column.
The mobile phase,
on the other hand, is a solvent or solvent mixture which is forced at high
pressure through the separation column.
The individual
components of the sample migrate through the column at different rates because
they are retained to a varying degree by interactions with the stationary
phase.
The sample is
detected by a detector. The detector
send a signal to the HPLC software.
At the end of this
operationa chromatogram in the HPLC software on the computer is obtained.
The chromatogram
allows the identification and quantification of the different substances.
Types of HPLC
·
Normal phase
·
Reverse phase
· Ion exchange
·
Size exclusion
Advantages of
HPLC
·
Speed
·
Efficiency
·
Accuracy
·
Versatile and
extremely precise when it comes to identifying and quantifying chemical
components.
Applications of
HPLC
- Analysis of drugs
- Analysis of synthetic polymers
- Analysis of pollutants in environmental analytics
- Determination of drugs in biological matrices
- Isolation of valuable products
- Product purity and quality control of industrial products and fine chemicals
- Separation and purification of biopolymers such as enzymes or nucleic acids
- Water purification
- Pre-concentration of trace components
- Ligand-exchange chromatography
- Ion-exchange chromatography of proteins
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